RESUMO: O objetivo deste estudo foi avaliar a divergência nutricional de clones de Brachiaria ruziziensis através da composição química e cinética de fermentação ruminal in vitro. Os tratamentos consistiram de 23 clones de Brachiaria ruziziensis (15, 16, 46, 174, 411, 590, 651, 670, 768, 776, 844, 859, 950, 965, 970, 975, 1067, 1093, 1296, 1765, 1806, 1894 e 1972), e as testemunhas Brachiaria ruziziensis cv ‘Kennedy’, Brachiaria brizantha cv ‘Marandu’ e a Brachiaria decumbens cv ‘Basilisk’, colhidas com 27 dias de rebrota. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos casualizados, com 26 tratamentos (genótipos) e três repetições. A avaliação da divergência nutricional foi realizada utilizando-se a análise de componentes principais e agrupamento aglomerativo hierárquico. Com base nas seguintes variáveis discriminatórias: digestibilidade in vitro da matéria seca; fibra em detergente neutro; lignina; proteína bruta; taxa de degradação de carboidratos não fibrosos e; taxa de degradação de carboidratos fibrosos. A avaliação da divergência nutricional dos clones de B. ruziziensis baseou-se nos dois primeiros componentes principais (DIVMS e FDN), explicando 96.2% da variância total. As variáveis de menor contribuição para a discriminação dos clones foram as taxas de degradação dos carboidratos fibrosos e não fibrosos. Na análise de agrupamento aglomerativo hierárquico foram identificados cinco grupos distintos, em que o grupo V, formado pelos clones 46, 768 e 1067 destacou-se em relação aos demais por apresentar valores superiores de digestibilidade in vitro da matéria seca.

ABSTRACT: The aim of this study was to evaluate the nutritional diversity of Brachiaria ruziziensis clones through chemical composition and in vitro kinetics of ruminal fermentation. Twenty three clones of Brachiaria ruziziensis were used (15, 16, 46, 174, 411, 590, 651, 670, 768, 776, 844, 859, 950, 965, 970, 975, 1067, 1093, 1296, 1765, 1806, 1894 and 1972) and Brachiaria ruziziensis cv. ‘Kennedy’, Brachiaria brizantha cv. ‘Marandu’ and Brachiaria decumbens cv. ‘Basilisk’ as controls within 27 days of harvesting. The experimental design used randomized blocks with 26 treatments (genotypes) and three replications. Evaluation of the nutritional divergence was performed using principal components analysis, based on the following discriminatory variables: in vitro dry matter digestibility (IVDMD), neutral detergent fiber (NDF), lignin, crude protein (CP), degradation rate of non-fibrous carbohydrates (KdNFC) and degradation rate of fibrous carbohydrates (KdFC). The evaluation of the nutritional diversity of Brachiaria genotypes was based on the two main components (IVDMD and NDF), which explains 96.2% of the total variance Variables of lower contribution to the discrimination of the clones were as degradation rates of the fibrous and non-fibrous carbohydrates. In the agglomerative hierarchical grouping analysis, five distinct groups were identified, where V group, formed by clones 46, 768 and 1067 have higher values of IVDMD compared to the other clones.

We evaluated the effect of adding four levels (0, 4, 8 and 12 g/kg, as fed) of a mixture (9:1) of urea and ammonium sulfate (UAs) to sugarcane on feed intake and digestibility, productive performance and metabolism of nitrogen compounds of dairy cows. Twelve multiparous Holstein cows (12.6±0.5 kg/d of milk, 225±90 days in milk) were distributed in three 4 × 4 Latin squares, receiving diets with the same amount of nitrogen (125 g crude protein/kg of dry matter). Concentrate feed was supplied at a ratio of 1 kg for each 3 kg of milk produced. The sugarcane presented 21.9 ºBrix. The level of UAs did not affect intake, total digestibility of diet components, milk production or milk components. Increasing UAs level linearly increased concentration of plasma urea nitrogen (PUN), urinary excretion of nitrogen and contribution of non-urea nitrogen in the urinary excretion and linearly reduced milk production/urinary excretion of nitrogen ratio. In spite of the linear increase of PUN with increased urea, the maximum value observed (14.31 mg/dL) was below the threshold value of 20 mg/dL, above which reproductive function may be compromised. In diets with sugarcane for dairy cows with production below 15 kg/day, the UAs level may be raised from 0 to 12 g/kg natural matter without impairing performance.

Avaliaram-se os efeitos das características químicas e da digestibilidade in vivo da FDN (DFDN) sobre o consumo, a digestibilidade e o desempenho de vacas leiteiras em confinamento utilizando-se meta-análise a partir de 285 observações de seis experimentos. Utilizaram-se dados de animais alimentados com dietas à base de silagem de milho (n = 213) ou cana-de-açúcar (n = 72). Apesar do menor teor de FDN da cana-de-açúcar (45,27% da MS) em relação à silagem de milho (54,48%), observaram-se menores consumos de MS e FDN, que refletiram em menor produção de leite. Verificou-se maior redução no comsumo de matéria seca (kg/dia) com aumento do teor de FDNf (FDN de forragem, % da MS) em dietas com canade-açúcar (332,4 g de MS para cada 1% no teor de FDNf) em relação à silagem de milho (96 g de MS para cada 1% no teor de FDNf). O maior efeito de repleção ruminal da FDN da cana-de-açúcar deve-se à fração indigestível, majoritária, apesar da maior taxa de degradação da fração potencialmente degradável da FDN em relação à silagem de milho. A produção de leite não-corrigida (PL) e corrigida para 4% de gordura (PLC) e o teor de proteína do leite reduziram linearmente com o aumento no teor de FDNf, independentemente da fonte de forragem. Porém, a PL e PLC não foram afetadas pelo nível de FDNnf (FDN de não-forragem). Os consumos de MS, FDN e NDT e o teor de gordura no leite reduziram linearmente com aumento na relação lignina:FDN, com maior amplitude em dietas à base de cana-de-açúcar em relação à silagem de milho. O consumo de MS, a produção de leite e a produção de leite corrigida reduziram linearmente e na mesma magnitude entre as fontes de forragens, com o aumento na DFDN da dieta. O efeito do teor FDN e lignina sobre o consumo, a digestibilidade e o desempenho animal depende da fonte utilizada.

It was evaluated the effects of the chemical characteristics and in vivo NDF digestibility (IVNDFD) on intake, digestibility and performance of dairy cows in fedlot by using a meta-analysis procedure from 285 observations of six experiments. It was used data of animals fed diets based on corn silage (n = 213) or sugarcane (n = 72). Despite the lower NDF content of sugarcane (45.27% of DM) compared to corn silage (54.48%), it was noted lower intakes of dry matter (DMI) and NDF, which responded with a lower milk yield. It was observed a greater reduction in DMI (kg/day) with the increase of NDFf (NDF forage, % DM) in sugarcane diets (332.4 g of DM for each 1% of NDFf) in relation to corn silage (96 g of DM for each 1% of NDFf). The greatest effect of ruminal repletion of sugar cane NDF is caused by the indigestible fraction, majoritary, despite the highest degradation rate of NDF potentially degradable fraction in relation to corn silage. Milk production not corrected (MP) and MP corrected to 4% fat (MPC) and the content of milk protein decreased linearly with the increase of NDFf content, regardless of the forage source. However, MP and MPC were not affected by NDFnf (non-forage NDF) level. Intakes of DM, NDF, TDN and milk fat content decreased linearly with increase in the lignin:NDF ratio, with greater amplitude in sugarcane based diets in relation to silage corn. Dry matter intake, MP and MPC reduced linearly and at the same magnitude among forage sources, with the increase in NDFD of the diet. The effect of NDF and lignin on intake, digestibility and animal performance depend upon the source used.

Avaliou-se a resposta de novilhas leiteiras alimentadas com dieta à base de silagem de milho e com 1,3 kg/dia de concentrado em comparação a três dietas à base de cana-de-açúcar corrigida com 1% de ureia + sulfato de amônio (9:1) (ureia), com 1,3; 2,0 e 2,7 kg/dia de concentrado. Foram utilizadas 20 novilhas (12 da raça Holandesa e oito da raça Pardo-Suíça) em delineamento de blocos casualizados, com cinco blocos formados de acordo com o peso inicial e a raça dos animais. Os consumos de matéria seca, matéria orgânica e fibra detergente neutro não diferiram entre a dieta à base de silagem de milho e aquelas à base de cana-de-açúcar. Maior consumo de extrato etéreo foi observado quando fornecida a dieta à base de silagem de milho em comparação àquelas à base de cana-de-açúcar. Os consumos de carboidratos totais e carboidratos não-fibrosos diferiram entre a dieta com silagem de milho e as dietas à base de cana-de-açúcar (1,3 e 2,0 kg de concentrado). O consumo de nutrientes digestíveis totais observado com o fornecimento da dieta à base de silagem de milho foi menor que o obtido com a cana-de-açúcar (2,0 kg de concentrado). As dietas tiveram efeito significativo nos coeficientes de digestibilidade de proteína bruta, extrato etéreo, carboidratos totais e fibra em detergente neutro. Não houve diferença significativa no ganho de peso total nem no ganho médio diário entre a dieta à base de silagem de milho e aquela à base de cana-de-açúcar com 2,7 kg de concentrado em relação às dietas com cana-de-açúcar. O pH ruminal não diferiu nos tempos de coleta entre as dietas experimentais. A concentração de nitrogênio amoniacal mais baixa foi observada 3 horas após a alimentação nos animais alimentados com dieta à base de silagem de milho. A cana-de-açúcar corrigida e com maior participação de concentrado (relação volumoso:concentrado ± 45:55, na base seca da dieta) pode ser utilizada em substituição à silagem de milho em sistemas de produção de leite com idade ao parto próxima dos 24 meses.

This study evaluated the response of dairy heifers fed corn based silage with 1.3 kg/day of concentrated in comparison with three sugar cane-based diets corrected with 1% of urea + ammonium sulphate (9:1) (urea), with 1.3; 2.0 and 2.7 kg/day of concentrate. A total of 20 heifers were used (12 Holstein breed and 8 Brown Swiss breed heifers) in a randomised block design, with 5 blocks formed on the basis of initial live weight and breed. The consumption of dry matter, organic matter and neutral detergent fiber did not differ between corn-silage based diet and sugar-cane based diet. Higher consumption of ether extract was found when diet based on corn silage was supplied in comparison to those based on sugar cane. Intakes of total carbohydrate and non-fibrous carbohydrates differed between corn silage diet and those based on sugarcane (1.3 and 2.0 kg concentrate). Total digestible nutrient intake observed with supply of the diet based on corn silage was lower than that obtained with sugar cane (2 kg concentrate). Diets had a significant effect on coefficients of digestibility of crude protein, ether extract, total carbohidrates and neutral detergent fiber. There was no significant difference on total weight gain neither on average daily gain between the corn-silage based diet and the sugar-cane diet with 2.7 kg of concentrate in relation to the sugar-cane diets. Ruminal pH did not differ at collection times among experimental diets. The lowest concentration of N-NH3 was observed in animals fed corn silage-based diet 3 hours after feeding compared to the sugar cane-based treatments. A milk production system with heifers calving at 24 months and fed a diet containing moderate to high concentrate levels (± 45:55, forage:concentrate), sugar cane forage added with 1% of a mixture of urea + ammonium sulfate (9:1, urea:ammonium sulphate) can be a substitute for corn silage.

Avaliou-se a influência do fornecimento de concentrados à base de farelo de soja ou farelo de algodão em dietas com silagem de milho sobre o balanço de nitrogênio e a produção de proteína microbiana em fêmeas leiteiras em crescimento. As dietas foram constituídas da combinação de dois níveis de concentrado (1 ou 2 kg) e duas fontes proteicas (farelo de soja ou farelo de algodão). Os animais que consumiram concentrado na quantidade de 2 kg/dia apresentaram maior consumo de nitrogênio total, entretanto não houve efeito significativo sobre o N-fecal, N-urinário e o balanço de nitrogênio. A interação entre o nível de concentrado e a fonte proteica influenciou o nitrogênio ureico na urina (N-urina), mas não alterou os níveis de nitrogênio ureico no plasma. Os níveis de concentrado e as fontes proteicas não afetaram as concentrações de purinas totais e alantoína na urina, a porcentagem de alantoína em relação às purinas totais, os níveis de ácido úrico na urina e nitrogênio microbiano nem a eficiência microbiana. O fornecimento de 1 ou 2 kg de concentrado contendo farelo de soja ou farelo de algodão como fontes proteicas para novilhas leiteiras em crescimento não afeta a eficiência microbiana, entretanto o fornecimento de 2 kg de concentrado aumenta a excreção de nitrogênio nas fezes.

The objective of this work was to evaluate effect of based-soybean or cottonseed meal concentrate rations in diets with corn silage on nitrogen balance (NB) and microbial protein production in growing dairy females. diets consisted of the combination of two levels of concentrate ration, 1 or 2 kg, and two protein sources, soybean meal or cottonseed meal. The animals that consumed 2 kg of concentrate ration showed greater total nitrogen intake, however, there was no significant effect on fecal-N, urine-N and nitrogen balance. The interaction among the concentrade levels and the protein source affected the urine uric N (N-urine) but did not change the levels of ureic nitrogen in the plasma. Levels of concentrate and protein sources did not affect concentrations of total purine and allantoin in the urine, the percentage of allantoin regarded to total purine, the levels of uric acid in the urine, microbial nitrogen neither the microbial efficiency. The supply of 1 or 2 kg of concentrate ration for growing dairy heifers, using soybean meal or cottonseed meal as protein sources does not affect microbial efficiency, although the supply of 2 kg of concentrate ration causes N waste in feces.

Foram avaliadas dietas com silagem de milho e concentrado à base de farelo de soja ou farelo de algodão para fêmeas leiteiras. Quatro dietas experimentais foram constituídas da combinação de dois níveis de concentrado (1 ou 2 kg) e duas fontes proteicas (farelo de soja ou farelo de algodão). Observou-se efeito da interação nível de concentrado × fonte proteica no consumo de matéria seca (MS), fibra em detergente neutro (FDN) e no consumo de nutrientes digestíveis totais (NDT). A quantidade de concentrado influenciou os consumos de proteína bruta (PB), FDN, extrato etéreo (EE), carboidratos nãofibrosos (CNF), matéria orgânica (MO) e de PB por kg de NDT. Não houve efeito nas digestibilidades da MS, FDN, MO e para NDT, porém a fonte proteica influenciou as digestibilidades de PB, EE e CNF. Houve efeito da quantidade de concentrado sobre o ganho de peso (GP) e da interação quantidade de concentrado × fonte proteica sobre o ganho de peso por cm de ganho em altura da cernelha. A dieta com 1 kg de concentrado à base de farelo de algodão foi insuficiente para ganho de peso de 800 g/dia, enquanto as dietas com 2 kg de concentrado propiciaram o maior ganho de peso. Entretanto, a dieta constituída de 2 kg de concentrado à base de farelo de soja foi mais eficiente, pois propiciou maior crescimento linear das novilhas, com ganho médio de 820 g por dia. Equações de predição do peso corporal com base no perímetro torácico apresentam maior acurácia em relação a equações baseadas em outras medidas lineares.

Diets for dairy heifers were assessed with corn silage and soybean or cotton seed based concentrate. Four experimental diets consisting of the combination of two concentrate levels, 1 or 2 kg, and two protein sources, soybean meal or cotton seed meal. The effect of the interaction was observed for intake of dry matter (DM), neutral detergent fiber (NDF) in % live weight and total digestible nutrient intake (TDN). The quantity of concentrate influenced the intakes of crude protein (CP), NDF, ether extract (EE), non-fibrous carbohydrates (NFC), organic matter (OM) and CP per kg TDN. There was no significant effect of the treatments for DM, NDF, OM and NDT digestibility but the protein source influenced the CP, EE and NFC digestibility. There was an effect of concentrate quantity for weight gain (WG), and there was effect of the concentrate quantity × protein source interaction for weight gain per cm of height gain of the cernelha. The diet consisting of 1 kg cotton seed based concentrate was insufficient to reach 800 g/day weight gain and diets consisting of 2 kg concentrate resulted in greater weight gain. However, the diet consisting of 2 kg soybean meal based concentrate was more efficient because it gave greater linear growth to the heifers with an 820g mean gain per day. Body weight prediction equations based on the thorax perimeter are more accurate in prediction compared to the other linear measurements.

Avaliou-se o consumo, a digestibilidade dos nutrientes e o teor de nutrientes digestíveis totais (NDT) da cana-deaçúcar e das silagens de capim-elefante, de milho e de sorgo em ovinos. Além disso, estimou-se o teor de NDT de acordo com o sistema de equações proposto pelo NRC (2001). Foram utilizados 20 ovinos, sem raça definida, machos, castrados, alojados em gaiolas de metabolismo, distribuídos em um delineamento inteiramente casualizado, sendo quatro tratamentos (volumosos) e cinco repetições (animais). A determinação da digestibilidade dos nutrientes foi realizada pela coleta total de fezes, com uso de sacolas coletoras. A comparação dos valores de NDT observados e estimados foi feita por meio do ajuste do modelo de regressão linear simples dos valores preditos sobre os valores observados. Os ovinos alimentados com as silagens consumiram maiores quantidades (P < 0,05) de matéria seca (MS), proteína bruta (PB), extrato etéreo (EE) e fibra em detergente neutro (FDN) em relação aos alimentados com cana-de-açúcar. Não houve diferença (P > 0,05) para o consumo de NDT entre as silagens. As digestibilidades aparentes da MS, MO, PB e EE não diferiram (P > 0,05) entre os tratamentos. Constataram-se diferenças (P < 0,05) entre os valores estimados e observados de NDT e das frações digestíveis da PB, da FDN e dos carboidratos não-fibrosos (CNF). As equações propostas pelo NRC (2001) mostraram-se inadequadas para estimar o valor energético dos volumosos para ovinos.

Nutrient intake, apparent digestibility and total digestible nutrients (TDN) levels of sugar cane, elephant grass silage, corn silage and sorghum silage were evaluated in sheep. The TDN values of feeds were also estimated with the equations proposed by NRC (2001). Twenty male castrated rams, housed in individual pens, were distributed in a randomized design in four treatments (feedstuffs) and five repetitions (animals). Nutrient apparent digestibility was determined by using total collection of feces. To compare predicted TDN values with in vivo TDN values, data were adjusted to a linear regression model. Sheep fed with the silages consumed larger amounts (P < 0.05) of nutrients than those fed with sugar cane. There was not difference (P > 0.05) for TDN intake among silages. The apparent digestibility of the dry matter (DM), organic matter (OM), crude protein (CP), ethereal extract (EE) and neutral detergent fiber (NDF) did not differ (P > 0.05) among treatments. There was difference (P < 0.05) between predicted and in vivo values of TDN. The equations proposed by NRC (2001) were not suitable to predict energetic value of tropical forages.

Objetivou-se avaliar estimativas de digestibilidade e de produção microbiana utilizando fibra em detergente neutro e ácido indigestível (FDNi e FDAi, respectivamente) e comparar a produção microbiana estimada pelos métodos das bases purinas e excreção urinária de derivados de purinas. Utilizaram-se quatro novilhas Holandês-Zebu com peso vivo médio inicial de 220 kg, fistuladas no rúmen e no íleo, mantidas em regime de confinamento com dieta à base de feno de capim-Tifton (Cynodon spp.), oferecido ad libitum, e 1 kg de concentrado (27% PB). O experimento durou 60 dias: sete de adaptação à dieta (antes do primeiro período), três períodos experimentais de 15 dias cada e quatro dias de intervalo entre os períodos. Foram realizadas coleta total de fezes, coleta de digesta omasal e ileal, coleta de conteúdo ruminal para isolamento bacteriano e coleta de amostra spot de urina. Para determinação dos fluxos de digesta omasal e ileal, foram utilizados como indicadores a FDNi e a FDAi. As condições do rúmen foram favoráveis à produção microbiana, com valores de pH e N-NH3 de 6,7 a 6,9 e de 10,3 a 14,1 mg/dL, respectivamente. A recuperação da FDAi não diferiu de 100% e produziu estimativas similares à excreção fecal e à digestibilidade total, quando comparada à coleta total de fezes, diferentemente de FDNi. As estimativas da produção microbiana via quantificação de derivados de purinas em amostras spot de urina não foram similares às obtidas por procedimentos invasivos via fluxo de matéria microbiana omasal. Assim, recomenda-se utilização de FDAi para estimativas de digestibilidade total e parcial e, para a produção microbiana, a excreção urinária dos derivados de purinas.

The objective was to evaluate the estimate of digestion and microbial production by using indigestible neutral and acid detergent fiber (iNDF and iADF respectively) and to compare microbial production estimated by purine bases in the omasum and urinary excretion of purine derivatives. Four rumen and ileum fistulated Holstein-Zebu heifers with average initial 220 kg LW was maintained in confined regime fed diet based on Tifton (Cynodon spp.) hay, offered ad libitum and 1kg of concentrate (27% CP). The experiment lasted 60 days: seven for adaptation to the diet (before the first period); three 15 day-experimental periods and four days of interval among periods. Total collection of feces, omasum and ileum digesta sampling, rumen contents sampling for bacterial isolation and sampling of urine spot were performed. For the determination of omasal and ileal flow, iNDF and iADF were used as markers. Rumen enviromment was favourable for microbial growth, showing pH values between 6.7 to 6.9 and NH3-N values from 10.3 to 14.1 mg/dL. Recovery of iADF did not differ from 100% and produced similar estimation for fecal excretion and total digestion, when compared to total fecal sampling, differently of iNDF. Estimation of microbial production through quantification of purine derivative in urine spot samples was not similar to the obtained by invasive procedure through omasal microbial matter. Thus, it is recommended to use iADF for partial and total digestion estimation and urinary excretion of purine derivative for microbial production estimation.

Objetivou-se avaliar a digestibilidade intestinal da FDN estimada por diferentes indicadores e o efeito das amostras coletadas no período diurno ou diário sobre a digestibilidade desse nutriente. Utilizaram-se quatro novilhas Holandês-Zebu, fistuladas no rúmen e no íleo, mantidas em regime de confinamento com dieta à base de feno de capim-tifton (Cynodon spp.), oferecido ad libitum, e 1 kg de concentrado (27% PB). O experimento durou 60 dias divididos em três períodos de 15 dias. A adaptação à dieta experimental foi de sete dias e, entre os períodos, respeitou-se um intervalo de quatro dias. No 1º, 7º e 13º dias de cada período experimental, realizou-se coleta total de fezes; do 2º ao 4º dia, coleta de amostra de digesta omasal e, do 8º ao 10º dia, amostras de digesta ileal. Para a mensuração do fluxo de digesta omasal, foram utilizados os sistemas de indicadores único e duplo. No sistema único, foram comparados a fibra em detergente neutro indigestível (FDNi), a fibra em detergente ácido indigestível (FDAi) e o óxido crômico (Cr2O3). No sistema duplo, foram comparadas as associações entre o complexo de cobalto-ácido etilenodiaminotetracético (Co-EDTA) com a FDNi (Co-FDNi) e a FDAi (Co-FDAi). Para estimativa do fluxo ileal, foram utilizados apenas os indicadores únicos. Não foi verificada diferença significativa entre as amostras de digesta coletadas apenas no período diurno e aquelas coletadas no período diário, portanto, a digestibilidade pode ser estimada com coleta de amostras realizadas apenas no período diurno. Embora a FDNi, a FDAi e o Co-FDAi possam ser utilizados na estimativa de parâmetros de digestibilidade parcial na coleta de digesta omasal, recomenda-se o uso das fibras indigestíveis por serem menos onerosas e de melhor manipulação.

The objective of this trial was to investigate the intestinal digestion of neutral detergent fiber (NDF) using different markers and the effect of sampling collection period (daytime vs. diurnal) on nutrient digestion. Four crossbred Holstein x Zebu heifers fitted with ruminal and ileal cannulas were used in this trial. Animals were housed in individual pens and fed ad libitum bermudagrass hay plus 1 kg of concentrate (27% CP). The experiment lasted 60 days with seven days for diet adaptation and four days interval between each of the three 15-days experimental periods. Total fecal collection was done on day 1, 7, and 13, omasal sampling from day 2 to 4, and ileal digesta collection from day 8 to 10 of each period. Single [indigestible neutral detergent fiber (iNDF), indigestible acid detergent fiber (iADF), and chromium oxide (Cr2O3)] and double system markers [Co-EDTA plus iNDF (Co-iNDF) and Co-EDTA plus iADF (Co-iADF) were used to measure flow of omasal digesta. Only single markers were used to determine ileal digesta flow. No significant difference was observed on partial nutrient digestibility comparing samples collected during the daytime with those collected during a 24-h period (diurnal) suggesting that samples may be collect only during the daytime. Although iNDF, iADF and Co-iADF can all be used to estimate partial digestion of nutrients flowing past the omasum, it is recommended the use of internal markers (iNDF or iADF) because of low costs and simple determination.